²¸È鶯Îïϸ°û´«´úÅàÑø
Ëæ×Åϸ°û»ùÒò¹¤³ÌµÄ²»¶Ï·¢Õ¹£¬Ä¿Ç°ÓжàÖÖÉúÎï±í´ïϵͳ¶¼Äܹ»´ó¹æÄ£µÄÉú²úÖØ×éµ°°×£¬Ö÷Òª·ÖΪԺ˺ÍÕæºËÁ½Àà¡£ÕæºË±í´ïϵͳÓÖ°üÀ¨£º½Íĸ±í´ïϵͳ£¬²¸È鶯Îïϸ°û±í´ïϵͳ£¬À¥³æ¸Ë×´²¡¶¾±í´ïϵͳ¡£Ïà±È֮ϣ¬²¸È鶯Îïϸ°û±í´ïϵͳ×îÍ»³öµÄÓŵãÊÇÄܹ»´Ù½øµ°°×µÄÕýÈ·ÕÛµþºÍÌÇ»ù»¯µÈ·ÒëºóÐÞÊΣ¬´Ó¶ø±£Ö¤µ°°×µÄÌìÈ»»îÐÔ£¬Ä¿Ç°ÒѳÉΪ±í´ïºÍÉú²ú²¿·Öµ°°×Ò©Îï¡¢»ùÒò¹¤³Ì¿¹ÌåµÈÄ¿µÄµ°°×µÄÊ×Ñ¡ËÞÖ÷¡£
²¸È鶯Îïµ°°×±í´ï³£ÓõÄϸ°ûÓÐHEK293£¨ÈËÅßÉöϸ°û£©ºÍCHO£¨Öйú²ÖÊóÂѳ²Ï¸°û£©¡£ÕâÁ½ÖÖϸ°ûµÄÓ¦ÓÃ×îΪ¹ã·º£¬ÊÇÔÚÕæºËµ°°×±í´ïϵͳÖÐ×î³£ÓõÄϸ°û£¬¾ßÓÐÒÔÏÂÌØµã£º
- ¾ßÓÐ׼ȷµÄת¼ºóÐÞÊι¦ÄÜ£¬±í´ïµ°°×ÔÚÈκη½Ãæ¶¼×î½Ó½üÌìȻ״̬£»
- ¾ßÓÐÖØ×é»ùÒòµÄ¸ßЧÀ©ÔöºÍ±í´ïÄÜÁ¦£¬ÍâÔ´µ°°×ÕûºÏÎȶ¨£»
- ¾ßÓнϸߵÄÄÍÊܼôÇÐÁ¦ºÍÉøÍ¸Ñ¹ÄÜÁ¦£¬±í´ïˮƽ½Ï¸ß£»
- CHOÊôÓÚ³ÉÏËάϸ°û£¬ÊÇÒ»ÖÖ·Ç·ÖÃÚϸ°û£¬×ÔÉíºÜÉÙ·ÖÃÚÄÚÔ´µ°°×£¬ÓÐÀûÓÚÄ¿µÄµ°°×µÄ·ÖÀë´¿»¯£»
- HEK293ϸ°û¾ßÓиü¸ßµÄÉú³¤Ãܶȸü¿ìµÄÉú³¤ËÙ¶È£¬Ò×ÅàÑø£¬Ò×תȾ¡£
±¾ÎÄÖ÷Òª¶ÔHEK293ϸ°û¼°CHOϸ°û´«´úÅàÑøµÄ»ù±¾ÔÔò¡¢ÊµÑé²½Öè¼°×¢ÒâÊÂÏî½øÐнéÉÜ¡£
ϸ°ûÅàÑø»ù±¾ÔÔò
ºÏÊʵÄϸ°ûÅàÑø»ù
ºÏÊʵÄϸ°ûÅàÑø»ùÊÇϸ°û´«´úÅàÑø×îÖØÒªµÄÌõ¼þ£¬ÅàÑø»ù²»½öÌṩ¸øÏ¸°ûÔÚÌåÍâÉú³¤·±Ö³ÐèÒªµÄ»ù´¡ÎïÖÊ£¬»¹Î¬³Öϸ°ûÉú³¤µÄÕû¸ö»·¾³£¬²»Í¬µÄϸ°ûÓв»Í¬µÄÉú³¤Ï°ÐÔ£¬Òò´ËҪѡÔñºÏÊʵÄÅàÑø»ù¡£
ÓÅÖÊѪÇå
Ŀǰ£¬¶àÊýµÄºÏ³Éϸ°ûÅàÑø»ù¶¼ÓÐÌí¼ÓѪÇ壬³£ÓõÄѪÇåÓÐСţѪÇå¡¢ÂíѪÇåµÈ¡£ÑªÇåÖк¬ÓÐϸ°ûÉú³¤Ëù±ØÐëµÄÉú³¤Òò×Ó£¬×÷Ϊ²¸È鶯Îïϸ°ûÅàÑøµÄ¸½¼ÓÎѪÇåÊ®·Ö°º¹óÇÒ´æÔÚ¶àÖÖÎÊÌ⣬Òò´ËÈËÃÇÔÚ²»¶ÏѰÕÒ¿ÉÒÔÌæ´úѪÇåµÄÎïÖÊ¡£
ÎÞ¶¾ÎÞ¾úµÄÉú³¤»·¾³
ÌåÍâÉú³¤µÄϸ°ûȱ·¦¶Ô΢ÉúÎïºÍÓж¾ÎïÖʵĵÖÓùÄÜÁ¦£¬Ò»µ©±»ÎÛȾ£¬»áµ¼ÖÂϸ°ûËÀÍö¡£Òò´ËÔÚ½øÐÐϸ°û´«´úÅàÑøÊ±£¬ÎÞ¶¾ÎÞ¾úµÄÅàÑø»·¾³ÊDZØÒªÌõ¼þ¡£
ζÈÓëÆøÌå»·¾³
ϸ°ûÉú³¤ÐèÒªºã¶¨µÄζȣ¬Í¬Ê±ÆøÌ壨ÑõÆøÓë¶þÑõ»¯Ì¼£©Ò²ÊDz¸È鶯Îïϸ°ûÅàÑøµÄËù±ØÐëµÄÎïÖÊ£¬HEK293ºÍCHOµÄϸ°ûÅàÑøÌõ¼þÒ»°ãÊÇ37¡æ£¬5%µÄ¶þÑõ»¯Ì¼»·¾³¡£
ϸ°û´«´úʵÑéÁ÷³Ì
ϸ°û¸´ËÕ
- Ìáǰ½«Ë®Ô¡¹ø´ò¿ª£¬Ô¤ÈÈ37¡æ¡£
- ϸ°ûÅàÑø»ùÌáǰԤÈÈ£¬5-10mlÓÚ15mlÀëÐĹÜÖС£
- °Ñ¶³´æÏ¸°ûÁ¢¼´Í¶Èë37¡æË®Ô¡¹øÖУ¬Çá΢ҡ¶¯£¬´ýÈÚ»¯ºó£¨´ó¸Å1-1.5min£©£¬È¡³ö¡£
- ÓÃ75%ÒÒ´¼Ïû¶¾¹ÜÍâ±Ú£¬·ÅÈ볬¾»Ì¨,×ªÒÆµ½º¬5-10mlÅàÑø»ùµÄ15mlÀëÐĹÜÖУ¬ÀëÐÄ800-1000rpm£¬5min¡£
- È¥µôÉÏÇ壬¼ÓÈëÍêÈ«ÅàÑø»ùÖØÐüϸ°û£¬×ªÒƵ½ÅàÑøÃóÖУ¬Ç°ºó×óÓÒÇáÇáÒ¡¶¯£¬Ê¹ÅàÑøÃóÖеÄϸ°û·ÖÉ¢¾ùÔÈ¡£
- ±ê¼ÇºÃϸ°ûÃû³Æ£¬´úÊý£¬ÈÕÆÚ£¬ÅàÑø»ùµÈ£¬·Åµ½37¡æµÄ5% CO2ÅàÑøÏäÖÐÅàÑø¡£
- Ìù±Úϸ°ûÅàÑøÒ»°ãµÚ¶þÌì¾Í¿ÉÒÔÌù±Ú£¬¸ù¾Ýϸ°ûÉú³¤ËÙ¶È£¬2-3Ìì»»Ò»´ÎÅàÑø»ù¡£
- ÀëÐÄ¿ÉÄܶÔijЩϸ°ûÔì³ÉÉ˺¦£¬ÕâЩϸ°û¿ÉÒÔ²»ÀëÐÄ£¬Ö»ÐèÒª½«DMSOµÄŨ¶È½µµ½1%ÒÔϼ´¿É¡££¨Ò»°ã¶³´æÒºÖÐDMSOŨ¶ÈΪ10%£¬¼´1ml¶³´æÏ¸°ûÐè¼Ó9mlÅàÑø»ù¡££©
ϸ°û´«´úÅàÑø
- µ±ÅàÑøÃóÖеÄϸ°û¸²¸ÇÂÊ´ïµ½80%-90%ʱÐèÒª½øÐÐϸ°û´«´ú¡£
- ÎüµôÅàÑøÃóÖеľÉÅàÑøÒº¡£
- ÓÃ5ml PBSÏ´µÓϸ°û1-2´Î¡£
- ÓÃ1mlµÄtrypsin£¨ÒÈø£©ÈÜÒº£¬37¡æ×÷ÓÃÊý·ÖÖÓ£¬ÓÚµ¹Á¢ÏÔ΢¾µÏ¹۲죬µ±Ï¸°û³ÊÔ²Ðμ´½«·ÖÀëʱ£¬ÎüµôtrypsinÈÜÒº¡££¨Èô²»È¥µôtrypsinÈÜÒº£¬ÔòÔÚÏû»¯ºó¼ÓÈëÊÊÁ¿£¨5:1£©º¬ÑªÇåÅàÑø»ùÖÕÖ¹×÷Óã¬ÀëÐĺóÔÙÈ¥µôÉÏÇå¡££©
- ÇáÅÄÅàÑøÃó»òÅàÑøÆ¿Ê¹Ï¸°û´ÓÆ¿±ÚÍÑÂ䣬¼ÓÈëÊÊÁ¿µÄÐÂÏÊÍêÈ«ÅàÑø»ù£¬ÇáÈáµØ´µ´òÊý´Î£¬Ê¹Ï¸°û·ÖÉ¢¾ùÔÈ¡£ÔÙ¸ù¾ÝÏ¡ÊͱÈÀý×ªÒÆÖÁеÄÅàÑøÆ¿ÖУ¬Õý³£ÅàÑø¼´¿É£¬Ê£Óàϸ°ûÐüÒºÉáÆú£¬·ÅÈëÊÕ¼¯Æ¿ÖС££¨Ï¸°û´«´úʱ°´1£º5»ò¸ü´ó±ÈÀýÏ¡ÊÍ£©
- trypsinÈÜÒºÖпÉÒÔ¼ÓÈë0.02% EDTAÈÜÒº£¬½âÀëЧ¹û»á¸üºÃ£¬µ«Ïû»¯ºó²ÐÁôÔÚÅàÑø»ùÖеÄEDTA »áÓ°Ïìϸ°ûµÄÔÙ´ÎÌù±Ú¡£
ϸ°û¶³´æ
- À䶳ǰȷ±£Ï¸°û´¦ÓÚÖ¸ÊýÉú³¤ÆÚ£¬´«´úºóµÄ5mLϸ°ûÐüҺȡ³ö1mL½ÓÖÖµ½ÅàÑøÆ¿¼ÌÐø´«´ú¡£ÁíȡһÎÞ¾úÀëÐĹܣ¬½«Ê£Óà4mLϸ°ûÐüÒºÖÃÓÚÆäÖУ¬ÀëÐÄ1000rpm£¬5min£¨×ªËÙÎ𳬹ý1500rpm£©¡£
- ÀëÐĺ󵹵ôÉϲãÇåÒº£¬ÊÕ¼¯Ï²ãϸ°û³Áµí¡£ÏòÀëÐĹÜÖмÓÈë900ulÍêÈ«ÅàÑø»ù£¬ÓÃǹͷ·´¸´´µ´òÖØÐüÆðϸ°û¡£È¡ÉÙÁ¿Ï¸°ûÐüÒº¼ÆÊýϸ°ûŨ¶È¼°¶³Ç°´æ»îÂÊ¡£Ò»°ãϸ°ûŨ¶ÈΪ2~5¡Á106cells/mL½ÏÊÊÒË¡£
- ½«Ï¸°ûÐüҺתÈë1.5mLÎÞ¾ú¶³´æ¹ÜÖУ¬ÔÙ¼ÓÈë100ulÊÔ¼Á¼¶DMSO£¬»ìÔÈ£¬ÖƳÉϸ°û¶³´æÐüÒº£¨DMSO×îºóŨ¶ÈΪ10£¥£©¡£ÑÏÃÜ·â¿Úºó£¬×¢Ã÷ϸ°ûÃû³Æ¡¢´úÊý¡¢ÈÕÆÚ£¬È»ºó½øÐж³´æ¡£
- ´«Í³·½·¨£ºÀä´æ¹ÜÖÃÓÚ4¡æ 10·ÖÖÓ¡ú-20¡æ 30·ÖÖÓ¡ú-80¡æ 16~18Сʱ£¨¸ôÒ¹£©¡úÒºµª¹Þ³¤ÆÚ´¢´æ£¨-20¡æÎ𳬹ý1Сʱ£¬·ÀÖ¹°ûÄÚ±ù¾§¹ý´óÔì³Éϸ°ûËÀÍö£©¡£
ϸ°ûÅàÑø×¢ÒâÊÂÏî
- ϸ°ûÅàÑø´óÆ¿ºÃÓÚСƿ£¬Ï¸°ûÄܹ»³ä·Ö¼³È¡µ½Ñø·ÖÇÒÓÐÀûÓÚϸ°û¾ùÔÈ·Ö²¼
- ϸ°ûÅàÑø»ùDEMEΪ¸ßÌÇÅàÑø»ù
- ±£Ö¤Ï¸°ûÅàÑøÒºÐÂÏÊ£¬²ÉÓÃÉÙÁ¿¶à´ÎÅäÖ㬻òÅàÑø»ù±£´æÓÚ-20¡æ
- ¿ØÖÆÒȵ°°×øÏû»¯Ê±¼ä£¬Ïû»¯Ê±¼ä³¤£¬Ï¸°ûÌù±ÚЧ¹û²î
- ¿ØÖƺÃϸ°û´«´úʱ¼ä£¬Ï¸°ûûÓÐÍêÈ«ÆÌÂú¡¢Ï¸°ûÖ®¼äÁôÓпÕ϶ʱ´«´ú×î¼Ñ
- ϸ°û¶³´æºÍ¸´ËÕµÄÔÔòÊÇÂý¶³¿ì¸´£¬×î´ó³Ì¶ÈµÄ±£Ö¤Ï¸°û¸´Ëճɹ¦ÂÊ
Ïà¹Ø·þÎñ
Ïà¹ØÔĶÁ